Detta portokoll beskriver hur man blandar och framställer de vanligaste typerna bakterie-näring. Näringen brukar vanligtvis vara i formen av lös buljong eller en agar gel i petriskålar.
1. Lysogeny buljong (LB)
LB är ett näringsrikt medium som främst används för bakterietillväxt. Mediumet har varit industristandarden för odlingen av bland annat Escherichia coli bakterier sedan 1950-talet. Det går att köpa färdigt LB pulver, eller så blandar man ingredienserna för att sedan lösa upp de i vatten.
Procedur
1. Blanda följande ingredienser för att tillreda 1 L medium:
| Innehåll | Mängd |
|---|---|
| Jästextrakt | 5 g |
| NaCl | 10 g |
| Pepton | 10 g |
| dH2O | 975 mL |
2. Justera PH till 7.0 med hjälp av 1 M NaOH och 1 M HCl.
3. Autoclavera buljong blandningen.
2. Lysogeny buljong agar
LB agar är en blandning som härdas av agar pulver och passar bra för tillväxt av bakterier i petriskålar. Bakterierna växer då på en yta istället för i en lösning. För selektiv tillväxt måste tillsatser läggas till under tillredningen av agarplattorna, till skillnad från LB lösning där exempelvis antibiotika kan adderas vid senare tillfällen.
Procedur
1. Tillsätt 15 g / L agar-pulver i LB innan det autoklaveras.
2. Autoklavera buljong blandningen.
3. För selektiv tillväxt med antibiotika, kyl blandningen till cirka 55 °C och tillsätt typ av antibiotika baserat på dina organismers resistens (50 μg / μl – för 1 petriskål). Stegen utförs i denna ordning för att antibiotikan inte ska inaktiveras av autoklaveringen.
4. Häll blandningen i skålarna (10 ml / petriskål), låt härda.
5. Vänd skålarna och förvara vid 4 °C.
3. SOC-medium
Super Optimal buljong med Catabolite repression, eller förkortat SOC, är ett näringsrikt medium för bakterietillväxt. SOC är en justerad version av det vanligt använda LB-mediet. Tillväxt av E. coli i SOC-medium resulterar i högre transformationseffektivitet av plasmider.
Procedur
1. Blanda följande ingredienser för att tillreda 1 L medium:
| Innehåll | Mängd |
|---|---|
| Jästextrakt | 5 g |
| NaCl | 0.585 g |
| Pepton | 20 g |
| KCl | 0.186 g |
| MgCl2 | 0.95 g |
| MgSO4 | 1.2 g |
| dH2O | 975 mL |
2. Justera PH till 7.5 med hjälp av 1 M NaOH och 1 M HCl.
3. Autoclavera buljong blandningen.
4. När blindningen kylts till ett en temperatur under 50 °C, lägg till 20 mL filter steriliserad 20% glukos-lösning (4 g glukos lösta i 20 mL).
1 kommentar
Transformation – Allt om labbprotokoll! · mars 22, 2020 kl. 6:12 e m
[…] SOC-medium […]